Mag Fura 2；细胞内镁离子探针

Mag-fura-2 四钾盐是一种细胞内镁离子特异性荧光探针，属于紫外光激发的比率式探针。水溶性的盐形式适用于通过显微注射、从膜片移液管注入。

图1.Mag Fura 2化学结构

样本实验protocol

以下是我们推荐的将 AM 酯加载到活细胞中的方案。 本方案仅提供指导原则，应根据您的具体需要进行修改。

1. 在生长培养基中过夜制备细胞。
2. 第二天，将 1X Mag-Fura-2 AM 工作溶液添加到您的细胞板中。

   注意： 如果您的化合物干扰血清，请在染料加载前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。

3. 在 37 °C 的细胞培养箱中孵育载有染料的板 30 至 60 分钟。
4. 注意 孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。
5. 用 HHBS 或您选择的缓冲液（包含阴离子转运抑制剂，如 1 mM probenecid，如果适用）替换染料工作溶液，以去除任何多余的探针。
6. 根据需要添加兴奋剂，同时使用配备 Fura 2 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（如 FlexStation）的荧光板读取器测量荧光，在 Ex/Em1 = 340/510 nm 截止 475 nm 和 Ex/Em2 = 380/510 nm 截止波长 475 nm。

案例

图2.Mrs2 KD 对细胞内 Mg2+ 稳态的影响：同时加载 Mag-Fura-2 (a) 和 MitoFluor Red (b) 的 HeLa 细胞图像。 (c–f) 面板 a 和 b 中盒装区域的放大视图。 (c,d) Mag-Fura-2 在同一细胞中的定位，如图 a 和 b 所示，在 (c) 和之后 (d) 毛地黄皂苷的细胞膜透化作用之前。 (e) 毛地黄皂甙细胞膜透化后 MitoFluor Red 的定位。 (f) 显示了合并后的图像。 (g) 对照和 Mrs2 KD HeLa 细胞中的线粒体 Mg2+ 水平。 比较在 340nm 和 380nm 激发的 Mag-Fura-2 荧光的比率，表明线粒体 Mg2+ 水平，显示 Mrs2 KD 细胞减少（n =148 对照，n =105 Mrs2 KD 细胞来自 5 个实验） . (h–j) 通常装载 Mag-Fura-2 的 HeLa 细胞图像。 (h) 用 emGFP 标记的 Mrs2 KD 细胞的荧光图像。 (i) 载有 Mag-Fura-2（绿色）的对照和 emGFP 标记（红色）Mrs2 KD 细胞的合并荧光图像。 (j) 载有 Mag-Fura-2 的 HeLa 细胞在 340 和 380nm 激发下的荧光发射比图像。 伪彩色显示了在 340nm 到 380nm 激发的 Mag-Fura-2 信号的发射比。 (k) 对照和 Mrs2 KD 细胞中的胞质 Mg2+ 水平。 在 Mrs2 KD 细胞中，细胞溶质 Mg2+ 水平高于对照细胞（n = 304 对照，n = 384 Mrs2 KD 细胞来自 5 个实验）。

产品来自-biofount范德生物（货号HCR205292）

来源：范德生物BIOFOUNT